顯微鏡細胞化學是利用特異的化學或生化反應在顯微鏡下對細胞的化學成份進行定性與定位分析的方法.顯微鏡細胞化學是在光鏡細胞化學基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。所不同的是,顯微鏡細胞化學反應的結(jié)果要在所研究的化學成份的部位引起顯微子密度的改變,這是由顯微鏡的成像原理所決定的。顯微鏡根據(jù)造成細胞中顯微子密度變化的原因、可將顯微鏡細胞化學方法分為三類:
1、反應產(chǎn)物是不溶解的并且是高顯微子密度的。顯微鏡在固定劑中加入草酸鈉,能將細胞內(nèi)的鈣離子變?yōu)椴菟徕}沉。下面醫(yī)用顯微鏡廠家的小編為您介紹下顯微鏡細胞化學樣品制備的一般過程:
①醛類固定
②厚切片制備
③顯微鏡孵育
④餓酸后固定
⑤常規(guī)脫水、包埋、切片
顯微鏡孵育一步中孵育液的成份及孵育的條件隨所研究的酶而有所不同,將在后面結(jié)合具體方法討論。這里僅就①②兩步作一點簡要說明。為兼顧結(jié)構(gòu)和酶活性的保存,顯微鏡細胞化學中多使用甲醛和戊二醛的混合固定劑,其具體濃度因所研究的酶而異,需要注意的是,市售戊二醛中含有雜質(zhì),用于顯微鏡細胞化學固定時應當純化。純化方法有真空燕餾,活性碳過濾,離子交換,Sephadex G-10分離等。也可使用市場上出售的專用于顯微鏡細胞化學的純化戊二醛,這種戊二醛裝于安瓶內(nèi),處于無氧條件下。樣品于固定之后應制備成厚度約405m的切片,再進入孵育液,而不宜用組織塊。這是因為組織塊較大,孵育液成份不易浸透至其中心。而且各種孵育液成份擴散速度不同,由此可能導至組織中心部位的人工假象。制備厚切片可使用振動切片機或微切片機。
2、顯微鏡反應產(chǎn)物是不溶解的,經(jīng)過顯微鏡樣品制備中的常規(guī)鍬酸固定可變?yōu)楦唢@微子密度的.例如DAB可被細胞色素氧化酶所氧化而形成沉淀,并可被俄化,用于顯示酶所在部位。
3、反應產(chǎn)物本身是可溶性的,需要在孵育液內(nèi)加入俘獲劑而使其沉淀并賦于其高顯微子密度,多數(shù)顯示酶的顯微鏡細胞化學方法屬于此類。
上面內(nèi)容就是醫(yī)用顯微鏡廠家的小編為您介紹下光學顯微鏡細胞化學原理。下期咱們分享內(nèi)容再見~