物鏡利用入射光線透過(guò)時(shí)被檢物體進(jìn)行**次成像,得到物體放大的實(shí)像;目鏡的作用是把物鏡放大了的實(shí)像進(jìn)行第二次放大,是將物鏡放大的實(shí)像作為物體,進(jìn)一步放大成虛像并把物像映入觀察者的眼中。
顯微鏡的分辨率是指能被顯微鏡清晰區(qū)分的兩個(gè)物點(diǎn)的*小間距。根據(jù)衍射理論,顯微物鏡的分辨率為
sigma=0.61lamda/N.sinU ~1式中l(wèi)amda為所用光波的波長(zhǎng);N 為物體所在空間的折射率,物體在空氣中時(shí)N=1;U為孔徑角,即從物點(diǎn)發(fā)出能進(jìn)入物鏡成像的光線錐的錐頂角的半角;NsinU 稱為數(shù)值孔徑。當(dāng)波長(zhǎng)λ一定時(shí),分辨率取決于數(shù)值孔徑的大小。數(shù)值孔徑越大則能分辨的結(jié)構(gòu)越細(xì),即分辨率越高。數(shù)值孔徑是顯微物鏡的一個(gè)重要性能指標(biāo),通常與放大倍率一起標(biāo)注在物鏡鏡筒外殼上,例如40×0.65表示物鏡的放大倍率為40倍,數(shù)值孔徑為0.65。
分辨率和放大倍率是兩個(gè)不同的但又互有聯(lián)系的概念。當(dāng)選用的物鏡數(shù)值孔徑不夠大,即分辨率不夠高時(shí),顯微鏡不能分清物體的微細(xì)結(jié)構(gòu),此時(shí)即使過(guò)度地增大放大倍率,得到的也只能是一個(gè)輪廓雖大但細(xì)節(jié)不清的圖像。這種過(guò)度的放大倍率稱為無(wú)效放大倍率。
關(guān)于光學(xué)顯微鏡的使用:
1.顯微鏡的取送:①右手握鏡臂;②左手托鏡座;③置于胸前。
2.顯微鏡的旋轉(zhuǎn):①鏡筒朝前,鏡臂朝后;②置于觀察者座位前的桌子上,偏向身體左側(cè),便于左眼向目鏡內(nèi)觀察;③置于桌子內(nèi)側(cè),距桌沿5cm左右。
3.對(duì)光:①轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒徐徐上升,然后轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器,使低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔;②用手指轉(zhuǎn)動(dòng)遮光器(或片狀光圈),使*大光圈對(duì)準(zhǔn)通光孔,左眼向目鏡內(nèi)注視,同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡,使其朝向光源,使視野內(nèi)亮度均勻合適。
4.低倍物鏡的使用:①用手轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒徐徐下降,同時(shí)兩眼從側(cè)面注視物鏡鏡頭,當(dāng)物鏡鏡頭與載物臺(tái)的玻片相距2~3mm時(shí)停止。②用左眼向目鏡內(nèi)注視(注意右眼應(yīng)該同時(shí)睜著),并轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒徐徐上升,直到看清物象為止。如果不清楚,可調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,至清楚為止。
5.高倍物鏡的使用:使用高倍物鏡之前,必須先用低倍物鏡找到觀察的物象,并調(diào)到視野的正中央,然后轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器再換高倍鏡。換用高倍鏡后,視野內(nèi)亮度變暗,因此一般選用較大的光圈并使用反光鏡的凹面,然后調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋。觀看的物體數(shù)目變少,但是體積變大。
6.反光鏡的使用:反光鏡通常與遮光器(或光圈)配合使用,以調(diào)節(jié)視野內(nèi)的亮度。反光鏡有平面和凹面。對(duì)光時(shí),如果視野光線太強(qiáng),則使用反光鏡的平面,如果光線仍舊太強(qiáng),則同時(shí)使用較小的光圈;反之,如果視野內(nèi)光線較弱,則使用較大的光圈或使用反光鏡的凹面。
7.鏡頭的擦拭:①用專門的擦鏡紙;②擦鏡頭時(shí),先將擦鏡紙折疊幾次,然后朝一個(gè)方向擦,不可來(lái)回擦或轉(zhuǎn)動(dòng)擦;③如果鏡頭被油污污染,則可在擦鏡紙上滴幾滴二甲苯,然后按上述方法擦拭。
8.顯微鏡的放大對(duì)象:是物體的長(zhǎng)和寬,不是面積,更不是體積。
9.顯微鏡的焦距問(wèn)題:物鏡離裝片的遠(yuǎn)近,準(zhǔn)焦螺旋的使用。
10.顯微鏡使用時(shí)物象移動(dòng)方向:相反,即物象在視野何方,則裝片即向該方向移動(dòng)。
11.顯微鏡使用時(shí)異物的判斷:目鏡、物鏡或裝片上,通常通過(guò)移動(dòng)玻片(是否在玻片上),轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器(是否在物鏡上)來(lái)判斷,剩下在目鏡上。
12. 實(shí)驗(yàn)后顯微鏡的安置:顯微鏡使用完畢后,應(yīng)將玻片取嚇,將其機(jī)械部分用白紗布擦拭干凈;轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器,讓兩個(gè)物鏡偏于兩旁;轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒下降至*低點(diǎn),將反光鏡豎起,蒙上紅綢布 ,然后將顯微鏡鎖入箱內(nèi)。