生物顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)也包含蓋玻片以內(nèi)。因?yàn)樯w玻片的薄厚不規(guī)范,光線從蓋玻片進(jìn)到家氣體造成映射后的激光光路發(fā)生了更改,進(jìn)而造成了象差,這就是覆蓋差。覆蓋差的造成危害了光學(xué)顯微鏡的成象品質(zhì)。國際性上要求,生物顯微鏡中蓋玻片的規(guī)范薄厚為0.17mm,容許范疇在0.16~0.20mm,在物鏡的生產(chǎn)制造上己將此薄厚范疇的象差測算以內(nèi)。物鏡機(jī)殼標(biāo)注刻的0.17,就是說明該物鏡規(guī)定蓋玻片薄厚。
因?yàn)橹谱黾夹g(shù)性等緣故,生物顯微鏡中蓋玻片薄厚很有可能在0.16下列或0.18之上,因此便會(huì)產(chǎn)生覆蓋差。蓋玻片太厚,不應(yīng)該進(jìn)到物鏡的光線會(huì)進(jìn)到物鏡;蓋玻片過薄,則應(yīng)當(dāng)進(jìn)到物鏡的光線卻不可以進(jìn)到。
生物顯微鏡中變大倍數(shù)愈高,NA值愈大,覆蓋差愈顯著,尤以蓋玻片厚,覆蓋差更為嚴(yán)重。
在生物顯微鏡中清除覆蓋差理想化的方法,是用帶校準(zhǔn)環(huán)的物鏡來調(diào)整。這類物鏡常以40times干躁系物鏡。舊式光學(xué)顯微鏡可以用更改物鏡長短來調(diào)整,蓋玻片過厚,能夠?qū)⑽镧R減少;過薄,可將物鏡相對變長。但它是消沉的方式,因物鏡長短更改,放大率也隨著更改,另外也危害成象品質(zhì)。因而不適合科學(xué)研究用光學(xué)顯微鏡。
油浸系物鏡不會(huì)有覆蓋差難題,它是因?yàn)橛秃蜕w玻片的折光率都在1.52上下,因此產(chǎn)生勻稱的光學(xué)系統(tǒng)。可是應(yīng)用油鏡時(shí),生物顯微鏡中蓋玻片太厚,超出了工作中間距,則沒法變焦,乃至看不見圖像。
有的物境上標(biāo)著"-"標(biāo)記,一般為高倍物鏡(0.5times、0.75times、1times、2times),其NA值很低,不會(huì)受到蓋玻片的危害,這類物鏡能加也并不加蓋玻片;有的物鏡上標(biāo)著"0”標(biāo)記,為不可以加蓋玻片的物鏡,叫“無罩物鏡”。
在生物顯微鏡中物鏡數(shù)值孔徑越大,容許蓋玻片薄厚出現(xiàn)偏差的原因的范疇愈小,也表明越是低倍物鏡對蓋玻片薄厚的規(guī)定越嚴(yán)苛。